【摘要】：目的 檢測新一代的抗雌激素藥物EM65-2對子宮內膜癌細胞系RL95-2在體內和體外的作用，同時探討在體內和體外條件下VEGF調節因素。
材料和方法 RL95-2對雌激素和抗雌激素藥物的反應分體內和體外兩部分進行，體內實驗過程中我們首先建立了RL95-2細胞在切除卵巢后的Balb／c純系裸鼠皮下的移植瘤模型，然后通過皮下分別給予雌酮、苯甲酸雌二醇、EM65-2或安慰劑，通過定期測量裸鼠皮下移植瘤的徑線所計算的移植瘤的體積、試驗結束時移植瘤的重量、子宮的重量來檢測RL95-2細胞對雌激素和抗雌激素藥物EM65-2的反應。體外試驗過程中主要通過MTT法、平板集落生成試驗和微孔堿性磷酸酶測定法檢測RL95-2細胞對雌激素和抗雌激素藥物的反應。
VEGF的調控分也分為體內和體外兩部分進行，體內部分利用前面實驗中獲得的不同條件下的裸鼠的皮下移植瘤和小鼠的子宮www.yixuelunwen.org，通過免疫組化方法檢測不同雌激素和抗雌激素的條件下的VEGF的表達情況：體外部分，首先建立RL95-2細胞的無血清培養方法，然后建立無雌激素正常pH、無雌激素低pH的培養液和雌二醇濃度為10nM的正常pH等三種條件培養液，于培養的不同時間分離上清液，通過Elisa法檢測上清中VEGF的變化。實驗期間通過pH計監測條件培養液的酸堿度變化，并與試驗中的測得的VEGF的結果進行分析。
結果
1、將裸小鼠隨機分為不切除卵巢(NOVX)、切除卵巢(OVX)和切除卵巢后給予雌二醇(OVXE2)等三組，三組成瘤率100％；各組腫瘤體積大小不同，OVXE2組NOVX組OVX組，差異顯著(p0.05)；三組瘤重不同，差異顯著(p0.05)。
2、將36只裸鼠去卵巢后隨機分成A組：對照組；B組：5M165-2治療組；C組：給予雌酮；D組：雌酮和EM65-2組；E組：苯甲酸雌二醇組；F組：苯甲酸雌二醇和EM65-2組。A組皮下移植瘤緩慢地進行性生長；應用雌酮和苯甲酸雌二醇組腫瘤生長較快，且明顯大于對照組；B組的腫瘤生長速度短期內超過A組，而且于兩周內具有顯著性差異；D組和F組的腫瘤體積較C組和E組無顯著性差異。子宮重量A組最小，B組其次，C、D和F組間無顯著性差異，D組最大，D、C和F組間無顯著性差異，其余各組間具有顯著性差異。
3、在不同濃度的雌二醇的體外培養的條件下通過MTT法檢測的活細胞數目，細胞在接種后的前三天細胞數目變化不大，第四天開始細胞數目迅速增加，第七天開始增加速度下降；第八天開始加入雌二醇組活細胞數目仍在增加，而無雌二醇組活細胞數目開始下降；前五天各組的活細胞數目無顯著性差異：第六天至第八天出現顯著性差異；q檢驗的結果顯示雌二醇10nM組最高，雌二醇10~3nM和10~(-1)nM次之，此三組間無顯著性差異；其余兩組活細胞數目低于前三組，此兩組組間無顯著性差異；前三組與后兩組間有顯著性差異。無雌激素條件培養液 天津醫科大學婦產科學博士論文（中文摘要）